Qualitäts-PCR

[Rebecca Möhlenbrock]

Hallo,

wir sind beim Lernen über die Qualitäts-PCR gestolpert und können nun nicht so recht was damit anfangen. Es gibt wohl zwei interne Standards, die verwendet werden und man kann mit dieser PCR wohl z.B. die Viruslast im Serum überprüfen. Auch Primer spielen eine Rolle, aber weiter kommen wir dann schon nicht mehr. Was genau haben denn die internen Standards für eine Funktion und wie nutzt man sie? Und wie wertet man das Ganze am Ende aus?

Vielen Dank schon Mal für die Antworten

[Christopher Kreiss, Dipl.-Pharm.]

Liebe Frau Möhlenbrock,


die Durchführung der PCR-Methode mit internen Standards gilt gegenwärtig als äußerst zuverlässige Methode für die Quantifizierung der Viruslast (beispielsweise HIV, HBV oder HCV) in Blut-/Serumproben. Die Verwendung eines internen Standards dient hierbei im Grunde einer Art "In-Prozess-Kontrolle" der Extraktions- und Amplifikationsvorgänge bei der PCR.

Ich habe Ihnen im Folgenden ein Beispiel herausgesucht, welches das Verfahren recht anschaulich beschreibt.

http://tinyurl.com/jxrc8gp

(Seite 11)

Die hier genannte Methode kombiniert Real-Time-PCR mit der Verwendung eines internen Standards. Dieser besteht im konkreten Beispiel aus synthetischer RNA, welche die gleiche Bindungsstelle aufweist wie das Zielvirus (HIV). Hierbei wird der Probe eine definierte Menge des Standards hinzugefügt und zusammen mitamplifiziert. Anschließend wird die Amplifikation sowohl des Targets als auch des Standards mittels einer enzymatischen Farbreaktion detektiert / quantifiziert. Mittels einer Formel (im Beispiel angegeben) kann über das Verhältnis der jeweiligen Mengen die genaue Viruslast berechnet werden.

Ich hoffe, Ihnen hiermit weitergeholfen zu haben.


Mit sonnigen Grüßen :-) -

Christopher Kreiss