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Thema: Coomassie- oder Silberfärbung von LDH nach SDS-Disk-Page

  1. #1
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    Coomassie- oder Silberfärbung von LDH nach SDS-Disk-Page

    Hallo,

    mich würde interessieren welches Bandenmuster zu erwarten ist wenn man eine Coomassie- oder Silberfärbung von LDH nach einer SDS-Disk-Page durchführt.

    Meiner Meinung müsste das LDH durch die SDS Page denaturiert und somit für die Färbung deaktiviert werden -> also keine Bande.

    Ist das korrekt so?

    Weil ich habe auch was gelesen, dass sie nur für LDH Färbung deaktiviert sind. Bei Coomassie Färbung soll dann eine Bande bei ca. 140kDa sichtbar sein und noch kleine Flecken...

  2. #2
    Moderator Avatar von Dr. Christian Rosar
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    Hallo!
    Wenn Sie die Laktat-Dehydrogenase auf eine SDS-Page auftragen, wird sie sicherlich nicht mehr aktiv sein,
    aber dennoch entsprechend ihrer Größe aufgetrennt werden. Da es sich bei der SDS-Diskontinuerlichen Page um denaturierende Bedingungen handelt, kann man davon ausgehen, dass das LDH-Tetramer in seine Untereinheiten zerlegt wird und man diese dann entsprechend ihrer einzelnen Größen nachweist, so dass man mehrere Banden sieht. (Zuätzliche Banden kommen eigentlich immer vor, denn die Proteine werden meisten in Zellen exprimiert und die zelleigenen Proteine werden ebenfalls durch Coomassie (blau) angefärbt. Der eigentliche Nachweis ist aber der SDS-Page nachgeschaltet: der Western-Blot. Dazu wird das Gel der SDS-Page auf eine Membran geblottet: im Western-Blot. Dann erfolgt der spezifische Nachweise gegen eine der Einheiten der LDH, z.B. gegen LDH-A, welche eine Bande bei 37 kDa zeigt.

    Ich hoffe, das hilft.

    Mfg,

    Christian Rosar

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