Maxam-gilbert

[arnika]

Die Sequenzierungsmethode von Maxam und Gilbert beruht auf der chemischen Spaltung der DNA durch verschiedene Reagenzien und anschließender Auftrennung durch Gelelektrophorese... besonders hilfreich zur Vorgehensweise war für mich auch das folgende Schema: http://www.nd.edu/~aseriann/maxam.gif

als Anmerkung zu dieser Methode habe ich in meinem Skript den Hinweis, dass DNA notwendig ist... warum aber ist die Methode nicht auch für RNA nützlich, der Doppelstrang wird schließlich auch in einem Einzelstrang überführt? Ist Uracil (statt Thymin) der ausschlaggebende Punkt? Oder sind die Reagenzien bei RNA ungeeignet?




Mit besten Dank im Voraus!

[arnika]

Bei meinen eigenen Recherchen nach der MAXAM-GILBERT Methode bin ich leider auf eine weitere Frage gestoßen:

In einer Anmerkung im Buch >Biotechnologie für Einsteiger< von BROWN heißt es "... die Einzelstränge können gelelektrophoretisch getrennt werden, das gelingt aufgrund der Tatsache, dass ein Strang mehr Purinnucleotide enthält und deshalb geringfügig schwerer ist".

Aber es paaren sich doch immer eine Purin- mit einer Pyrimidinbase (A-T bzw. G-C), dann ist das Verhältnis doch ausgeglichen !?!

[Dr. Christian Rosar]

Hallo!
Ich habe folgende Links gefunden, die die Methode ziemlich gut beschreibt.
1) http://pharmazie.heimat.eu/downloads...uenzierung.pdf.
2) http://web.uni-frankfurt.de/fb14/eng...uenzierung.pdf
3) http://www.biologie-lk.de/showthread.php?t=20424


Zur Frage warum RNA nicht eingesetzt wird, hier ein Link zu einem Paper: http://www.pnas.org/content/76/4/1760.full.pdf.
Im ersten Absatz steht: "Maxam andGilbert(1)havedeviseda chemicalmethodtose- quence DNA. However,directapplicationoftheDNA se- quencingmethodtoRNA isimpossibleduetothedifferent chemicalpropertiesofRNA andthegreaterlabilityofits phosphodiesterbonds."

Ich hoffe, das hilft fürs erste!

Viele Grüße,

Christian
Ich hoffe, das hilft!

[arnika]

Vielen Dank!

Mit dem Hinweis aus dem Paper und den Links habe ich nun ausreichende Informationen zu der Methode
... und eine Erklärung für den ausschließlichen Einsatz von DNA.


Mit besten Grüßen Arnika